山东大学学报（理学版） ›› 2014, Vol. 49 ›› Issue (1): 25-30.doi: 10.6040/j.issn.1671-9352.0.2013.445
张佟佟,钱积成,朱长军,董智雄*
ZHANG Tong-tong, QIAN Ji-cheng, ZHU Chang-jun, DONG Zhi-xiong*
摘要：
黏着斑蛋白Supervillin(SVIL)是一个细胞膜结合蛋白分子,定位于细胞与细胞外基质接触面的黏着斑。为了进一步研究SVIL蛋白分子在细胞内的功能,应用分子克隆技术构建原核细胞表达质粒pGEXKG-SVILC302和pHIS8SVILC302,并在细菌BL-21(DE3)中用IPTG分别诱导表达GST-SVILC302和HIS-SVILC302融合蛋白。用谷胱甘肽琼脂糖凝胶柱亲和层析纯化GST-SVILC302蛋白,然后免疫新西兰大白兔制备SVIL多克隆抗体,并用Ni-NTA 柱子结合HIS-SVILC302蛋白,对其进行交联,纯化抗体。Western Blot(WB)和Immunofluorescence(IF)实验证明该抗体可以识别外源的GFP-SVIL和内源的SVIL蛋白,并且可以用于蛋白免疫沉淀实验。表明此SVIL多克隆抗体具有较高的特异性和灵敏度,为进一步研究黏着斑蛋白SVIL在细胞内的功能奠定了坚实的基础。
中图分类号:
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